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荧光显微镜分类及镜检术注意事项

点击次数:774 发布时间:2014-12-16
   荧光显微镜是用短波长的光线照射用荧光素染色过的被检物体,使之受激发后而产生长波长的荧光,然后观察。荧光显微镜广泛应用于生物等领域。

  (1)荧光显微镜一般分为透射和落射式两种类型:

  a.透射式:激发光来自被检物体的下方,聚光镜为暗视野聚光镜,使激发光不进入物镜,而使荧光进入物镜。它在低倍情况下明亮,而高倍则暗,在油浸和调中时,较难操作,尤以低倍的照明范围难于确定,但能得到很暗的视野背景。透射式不使用于非透明的被检物体。

  b.落射式:透射式目前几乎被淘汰,新型的荧光显微镜多为落射式,光源来自被检物体的上方,在光路中具有分光镜,所以对透明和不透明的被检物体都适用。由于物镜起了聚光镜的作用,不仅便于操作,而且从低倍到高倍,可以实现整个视场的均匀照明。

  (2)荧光镜检术的注意事项:

  a.激发光长时间的照射,会发生荧光的衰减和淬灭现象,因此尽可能缩短观察时间,暂时不观察时,应用挡板遮盖激发光。

  b.作油镜观察时,应用"无荧光油"。

  c.荧光几乎都较弱,应在较暗的室内进行。

  d.电源装稳压器,否则电压不稳不仅会降低汞灯的寿命,也会影响镜检的效果。

  目前许多新兴生物研究领域应用到荧光显微镜,如基因原位杂交(fish)等等。

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